Методы определения глюкозурии

Современные методы определения глюкозы

Герасименко В.А., к.м.н., Куриляк О.А., к.б.н.

Из архива газеты “Новости А/О Юнимед”

Определение концентрации глюкозы в крови – одно из наиболее часто выполняемых биохимических исследований в КДЛ. Причина исключительной популярности теста связана с высокой заболеваемостью сахарным диабетом. Данный тест выполняется как в условиях стационара, так и в поликлиниках. Больные сахарным диабетом вынуждены исследовать уровень глюкозы в крови в домашних условиях, поскольку без этой информации им трудно скорректировать свою диету, физические нагрузки, применение инсулина и других сахароснижающих препаратов. Исключительная важность теста и большие объемы выполняемых исследований стимулировали разработчиков к созданию различных типов приборов и методов определения концентрации глюкозы в крови.

В настоящее время существует достаточно много методов определения глюкозы. Их можно классифицировать следующим образом.

Методы определения глюкозы в сыворотке крови

– фотометрический по конечной точке

– отражательная фотометрия – сухая химия

Первые два метода крайне неудобны, токсичны и обладают низкой точностью, поэтому мы на них не будем останавливаться.

Глюкозооксидазный метод

Сегодня наибольшее распространение получили методы, основанные на использовании фермента – глюкозооксидазы. В основе метода лежит следующая реакция:

Глюкозооксидаза катализирует перенос двух водородных атомов с первого углеродного атома глюкозы на кислород, растворенный в жидком реагенте. При этом в ходе реакции образуется в эквимолярных количествах перекись водорода. Т.е. концентрация образовавшейся перекиси водорода точно равна определяемой концентрации глюкозы. Следовательно, использование глюкозооксидазной реакции, трансформировало задачу определения концентрации глюкозы в задачу определения концентрации перекиси водорода, которая, как будет показано ниже, значительно проще первой. И здесь есть несколько способов, широко используемых сегодня в лабораторной практике (см. схему).

Среди вышеперечисленных способов регистрации наибольшее распространение получил фотометрический биохимический метод, в котором молекулы перекиси водорода под действием фермента пероксидазы расщепляются с образованием активной формы кислорода – супероксид анион-радикала – О2 – , который в свою очередь окисляет хромоген, что приводит к значительному изменению спектра поглощения хромогена.

На рис. 1 и 2 показаны спектры рабочего раствора до внесения в него стандартного раствора глюкозы и после. Максимум поглощения реакционной смеси – (реактив + глюкоза) находится в области 500 нм. Соответственно, изменение оптической плотности конечной реакции на длине волны 480-520 нм пропорционально концентрации глюкозы, содержащейся в пробе.


Рисунок 1. Спектр рабочего раствора


Рисунок 2. Спектр реакционной смеси (рабочий раствор + глюкоза)

Большая популярность данного метода определения глюкозы объясняется его высокой специфичностью и простотой выполнения. Метод можно реализовать как с применением обычного фотометра (лучше специализированного биохимического фотометра типа Микролаб 540), так и с помощью автоматических биохимических автоанализаторов.

Наряду с методом фотометрирования по конечной точке, несколько лет назад появились наборы, в которых реализован кинетический метод фотометрирования. Суть метода состоит в том, что при определенном соотношении активностей глюкозооксидазы и пероксидазы, скорость образования окрашенного соединения некоторое время после внесения пробы в рабочий раствор будет пропорциональна концентрации глюкозы в пробе. Преимущество такого метода состоит в том, что результат не зависит от наличия в пробе других соединений, поскольку поглощение последних стабильно во времени. Этот метод требует применения кинетического фотометра, например Stat Fax 1904+, Stat Fax 3300, полуавтоматических анализаторов, например Clima 15, или автоматических биохимических анализаторов. Измерение концентрации глюкозы из цельной крови удобно выполнять с помощью приборов, работа которых основана на амперометрическом принципе измерения, при помощи специальных ферментных датчиков. Перекись водорода является крайне нестабильным химическим соединением и она может служить источником заряженных частиц. Именно это и используется в ферментных датчиках мембранного типа или электрохимических элементах портативных глюкометров.


Рисунок 3. Измерительная ячейка

В измерительной ячейке, сконструированной как проточная, находится измерительная камера, с одной стороны ограниченная ферментной мембраной (Рис. 3). На мембрану толщиной около 60 микрон специальным образом сорбирована глюкозооксидаза. С другой стороны мембраны к ней прижимается платиновый электрод.

Проба цельной крови (обычно 20 мкл) разводится в системном буферном растворе (эритроциты разрушаются), после чего подается по магистрали в проточную ячейку. Глюкоза, подвергается окислению под воздействием фермента глюкозооксидазы, находящейся на мембране. Образовавшаяся перекись водорода диффундирует через мембрану и окисляется далее в каталитической реакции под действием платины. Диффузия перекиси водорода на поверхность платины формирует ток, пропорциональный числу молекул Н2О2. Полученный таким образом сигнал обрабатывается прибором в соответствующее значение напряжения. Это измеренное значение пропорционально концентрации глюкозы в пробы.

В качестве примера приборов, использующих вышеописанный метод можно назвать автоматические анализаторы глюкозы Biosen (Германия). Эти приборы удобны для использования не только в стационарах, но и в поликлиниках, где анализ на глюкозу делают преимущественно из капиллярной крови.

Важным этапом в развитии методов клинической лабораторной диагностики стало появление «сухой химии». Естественно, одним из первых приложений этой технологии стала задача определения глюкозы в крови пациента. Первые приборы значительно уступали по точности традицинным лабораторным методам исследований. Однако, со временем, ряду фирм удалось разработать такие диагностические полоски и отражательные фотометры, которые обеспечили весьма высокую точность анализа. Широко популярными во всем мире в настоящее являются глюкометры One Touch и тест-полоски к ним производства компании Life Scan (США), которые удачно сочетают в себе аналитическую точность количественного ферментативного метода со скоростью и простотой «сухой химии».

Глюкометры One Touch предназначены для быстрого и точного измерения уровня глюкозы в цельной крови. Тест-полоска One Touch содержит все необходимые химические компоненты для двухэтапного глюкозооксидазного метода, включая ферменты глюкозооксидазу и пероксидазу, которые сорбированы на уникальную пористую гидрофильную мембрану. Результатом реакции является образование окрашенного комплекса. Интенсивность развившейся окраски регистрируется отражательным минифотометром.


Рисунок 4. Конструкция тест-полоски

В дополнении к этому, мембрана обладает гидрофильными свойствами, благодаря которым капля крови “притягивается” к поверхности тест-полоски при касании.Мембрана тест-полоск One Touch напоминает губку с микроскопическими порами и выполняет тройственную функцию. Она действует: 1) как резервуар, собирая необходимое количество крови, 2) как фильтр, блокируя твердый клеточный материал (эритроциты, лейкоциты и др.), 3) как гладкая оптическая поверхность, на которой измеряется отраженный свет. Последняя функция, в частности, очень важна для работы прибора. Она делает возможным считывать нижнюю часть полоски, тогда как кровь остается на верхней части тест-полоски. Соответственно, нет необходимости стирать (промокать) кровь с поверхности тест-полоски.

В состав приборов One Touch входит два специальных светодиода. Обработка развившейся окраски на тест-полоске идет следующим образом. Как только тест-полоска вставлена в прибор – происходит нулевое считывание. В этот момент на дисплее мы видим: “ЖДАТЬ”. Когда капля крови наносится на тест-полоску, плазма крови моментально сорбируется мембраной, тогда как эритроциты и излишки плазмы остаются на поверхности мембраны. После полного впитывания капли крови немедленно происходит окрашивание. Прибор регистрирует изменение величины отражения и автоматически запускает таймер. Через 45 секунд химическая реакция заканчивается, результат светоотражения обрабатывается. Окрашенный продукт реакции поглощает свет, испускаемый первым светодиодом. Форменные элементы крови и лишняя плазма также поглощают свет, излучаемый диодом. Чтобы скорректировать фоновое отражение, второе считывание производится вторым светодиодом на другой длине волны. Разность сигналов от первого и второго светодиода несет информацию о поглощении света хромогеном. Сигнал, полученный от хромогена для оценки концентрации глюкозы, соотносится со специальной калибровкой. Все приборы One Touch откалиброваны с использованием референтного метода на лабораторном анализаторе глюкозы. С помощью этой процедуры получается стандартная калибровочная кривая. Отметим, что достаточно сложно наладить производство тест-полосок, которые были бы абсолютно одинаковыми химически, в силу очень низкой концентрации реактивов. Для решения этой проблемы используется стандартная калибровочная кривая, состоящая из 16 –ти калибровочных линий. Контроль качества осуществляется сразу после производства тест-полосок, что позволяет определить, какая из калибровочных линий (от 1 до 16) может быть применена для данной тест-полоски. Это так называемый номер кода, который проставляется на упаковке тест-полосок. Эти 16 калибровочных линий также программируются в микропроцессоре прибора. Для получения оптимально точных результатов, номер кода, указанный на упаковке тест-полосок выставляется в приборе при помощи кнопки кода. Таким образом, неправильно установленный код на приборе может являться причиной ошибки измерения.

С момента появления на рынке приборов One Touch прошло большое количество клинических исследований в лабораториях России, Америки и Европы. Одно из таких исследований было проведено Эндокринологическим научным центром РАМН по заказу Российской Ассоциации Медицинской Лабораторной Диагностики. Специалисты Центра провели сравнительный анализ двух методов измерения уровня глюкозы в крови. Результаты, полученные на One Touch, сопоставлялась с данными, полученными на биохимическом анализаторе Spectrum II (Abbott Laboratories, США), реализующем гексокиназный метод определения глюкозы. Было исследовано 190 проб крови от 95 пациентов. Коэффициент корреляции результатов составил 0,98641. Коэффициент вариации в нормальном и патологическом диапазонах на глюкометре One Touch не превысил 2,5%.


Рис. 5. Корреляционная зависимость показаний “One Touch” и «Спектрум-2» (коэффициент корреляции 0,98641)

В заключении следует упомянуть и о недостатках глюкозооксидазного метода. Образующаяся перекись водорода и супероксид анион-радикал могут окислять не только хромоген, но и другие вещества, присутствующие в биологической жидкости: аскорбиновую кислоту, мочевую кислоту, билирубин. При этом, соответственно, доля перекиси, принимающая участие в окислении хромогена, снижается, что приводит к занижению результата по глюкозе. Этот метод линеен, как правило, до 20-30 ммоль/л глюкозы.В официальном отчете Эндокринологического научного центра РАМН сказано: «приборы One Touch обладают высокой точностью и правильностью, а также широким диапазоном измерений. Их можно использовать для диагностики неотложных состояний при диабете, в том числе бригадами “Скорой помощи”, поскольку эти приборы не только надежны, но и быстро дают результаты».

Гексокиназный метод

Регистрация осуществляется при длине волны 340 нм по светопоглощению НАДН. Этот метод является высокоспецифичным и не дает реакции с другими компонентами сыворотки крови. Гексокиназный метод считается референтным для определения глюкозы. Как правило, он линеен до 50 ммоль/л, что позволило его широко рекомендовать для клиник с эндокринологическими отделениями.

Из описанного разнообразия методов определения глюкозы сотрудники КДЛ могут решить для себя, какой способ определения и какой прибор выбрать:

  • Методы «мокрой» биохимии, реализованные на автоматических биохимических анализаторах, обеспечат нужды лабораторий с большим потоком анализов.
  • Анализаторы глюкозы типа Biosen требуют от оператора минимальных трудозатрат, так как они полностью автоматизированы и достаточно производительны (скорость от 50 до 200 проб в час).
  • Для лабораторий с небольшим числом исследований, а также экспресс-лабораторий удобен специализированный биохимический фотометр Микролаб 540.
  • Для бригад скрой помощи идеальное решение – глюкометры типа One Touch.

Т.о., задача КДЛ обеспечить не только быстрое, но и высокоточное определение глюкозы, на сегодняшний день вполне решаема.

Из-за чего появляется глюкозурия? Причины и диагностика

В этой статье вы узнаете:

Глюкозурия – это обнаружение глюкозы в анализе мочи. Принято считать, что в норме глюкоза с мочой не выделяется. Это не совсем верно. Небольшие количества глюкозы всё же попадают в мочу, но общедоступные современные методы диагностики не позволяют их обнаружить.

В здоровой почке при нормальном уровне сахара в крови глюкоза фильтруется, а затем обратно всасывается в почечных канальцах. Для всасывания необходимы специальные молекулы-переносчики, количество которых ограничено.

Почечный порог снижается во время заболеваний, у детей и беременных женщин.

Причины глюкозурии

Появление глюкозы в моче может быть вызвано физиологическими причинами, т. е. у здоровых людей, и патологическими, в результате заболеваний.

Физиологические причины глюкозурии:

  • беременность;
  • употребление большого количества сладкой пищи;
  • сильные стрессы.

Причины патологической глюкозурии:

  • сахарный диабет;
  • острые инфекционные заболевания, сопровождающиеся повышением температуры тела и интоксикацией;
  • заболевания почек (гломерулонефрит, пиелонефрит);
  • почечный диабет;
  • эндокринные заболевания (тиреотоксикоз, болезнь Иценко-Кушинга, феохромацитома);
  • ожоги, массивные травмы;
  • приём некоторых лекарственных препаратов.

Глюкозурия при беременности

Во время беременности организм женщины работает с усиленной нагрузкой. Уже в первом триместре начинает усиливаться почечный кровоток, достигая своего максимума к концу второго триместра. Увеличивается фильтрация мочи, что приводит к снижению почечного порога для глюкозы.

Читайте также:  Что из себя представляет компьютерная томография печени?

При появлении глюкозы в моче беременной женщины, необходимо дополнительное обследование, поскольку такая ситуация может быть как физиологической, вызванной самой беременностью, так и патологической, при развитии сахарного диабета и заболеваний почек. Кроме этого, глюкоза в моче служит питательным материалом для бактерий, что может привести к развитию воспалительных заболеваний мочевыводящих путей.

Дополнительно выполняется анализ крови на сахар, а при необходимости – и глюкозотолерантный тест. При подозрении на патологию почек проводят анализ мочи по Нечипоренко и ультразвуковое исследование почек.

Глюкозурия при стрессах и переедании

В ситуации сильного стресса организм начинает мобилизировать свои силы, выбрасывая в кровь большие количеств гормонов и биологически активных веществ. Они (особенно адреналин и кортизол) способствуют резкому повышению уровня глюкозы в крови, что впоследствии приводит к глюкозурии.

Употребление большого количества легкоусвояемых углеводов также увеличивает уровень сахара в крови, превышая почечный порог и вызывая появление глюкозы в моче.

Сахарный диабет

Появление глюкозы в моче прежде всего должно наталкивать на мысль о сахарном диабете, это наиболее частая причина. Глюкозурия при сахарном диабете обычно сопровождается и другими симптомами диабета: жаждой, сухостью во рту, выделением большого количества мочи, слабостью, утомляемостью, изменением веса.

Почечный порог для глюкозы неодинаков у всех больных диабетом. Он снижен у тех, кто получает инсулин, а также у страдающих диабетической нефропатией. Важно, что на поздних стадиях нефропатии глюкоза перестаёт выделяться с мочой, это говорит о выраженных изменениях в почках и развитии тяжёлой почечной недостаточности.

Не у всех больных сахарным диабетом есть глюкозурия. При хорошей компенсации заболевания и сахарах, близких к норме, выделения глюкозы с мочой не происходит.

Острые инфекционные заболевания

При длительном течении заболеваний, сопровождающихся повышением температуры тела и интоксикацией, развивается глюкозурия. Это связано сразу с несколькими факторами.

При лихорадке в организме вырабатывается большое количество биологически активных веществ, называемых цитокинами, которые вызывают спазм сосудов. В результате повышается артериальное давление, а значит, увеличиваются кровоток в почках и фильтрация мочи.

В результате стресса, вызванного повышенной температурой тела, происходит выброс адреналина, который приводит к распаду гликогена в печени. Гликоген – это основная форма запаса глюкозы в организме, при его распаде повышается уровень сахара в крови.

Заболевания почек

При поражении канальцев почек они начинают пропускать молекулы глюкозы в мочу. Это относится к таким заболеваниям, как хронический пиелонефрит, тубулоинтерстициальный нефрит, острая почечная недостаточность, поражение почек при других заболеваниях (ревматологических, кардиологических, эндокринных и т. д.).

Заболевания почек сопровождаются и другими изменениями в общем анализе мочи (повышение уровней лейкоцитов, эритроцитов, появление белка, цилиндров), поэтому постановка диагноза в этих случаях не вызывает затруднений.

Почечный диабет

Почечный диабет, или почечная глюкозурия – это заболевание, при котором происходит выделение глюкозы с мочой при нормальном её уровне в крови. Оно связано с потерей чувствительности почечных канальцев к альдостерону, гормону надпочечников. Альдостерон регулирует обмен калия и натрия, обеспечивая тем самым водно-солевой обмен.

Чаще почечная глюкозурия выявляется у детей и связана с генетическим дефектом. Такая форма диабета плохо поддаётся лечению. Ребёнку нужно соблюдать специальную диету с ограничением простых углеводов и повышенным потреблением сложных.

Некоторые формы почечного диабета связаны с генетическими поломками, вызывающими нарушение работы ферментов, участвующих в усвоении глюкозы. Другие вызваны воздействием токсических веществ.

Почечный диабет

Глюкозурия при эндокринных заболеваниях

При ряде эндокринных заболеваний, сопровождающихся образованием избыточного количества гормонов, повышается уровень глюкозы в крови (тиреотоксикоз, болезнь Иценко-Кушинга, феохромацитома и др.). Это вызвано выработкой гормонов, повышающих уровень глюкозы в крови, а также снижающих чувствительность организма к ней.

Часто на фоне этих заболеваний при длительном отсутствии компенсации развивается сахарный диабет.

Диагностика глюкозурии

Однократный общий анализ мочи не несёт в себе информацию, достаточную для постановки диагноза. Он может отражать нарушение диеты накануне, либо неправильную подготовку к сдаче. Для более точного выяснения степени потери сахара с мочой необходимо выполнить анализ на суточную глюкозурию.

Анализ сдаётся очень просто. В течение суток собирается вся моча в 2–3-х литровую ёмкость. Затем с утра она перемешивается, в стаканчик отливается объём 100–200 мл, он и приносится в лабораторию. На направлении нужно не забыть указать суточный объём мочи, свой рост и вес.

В течение суток нельзя обильно употреблять сладкое, испытывать физические и психические нагрузки, чтобы это не отразилось на результате анализа.

В норме глюкоза в суточной моче не обнаруживается. При её появлении проводится дальнейшее обследование с целью выявить причину.

Глюкоза в моче. Клинико-диагностическое значение глюкозурии

В моче здорового человека глюкоза содержится в очень низкой концентрации (0,06 — 0,083 ммоль/л). Поэтому, а также из-за низкой чувствительности методов, она не выявляется при исследовании мочи в клинико-диагностических лабораториях. Появление глюкозы в моче называется глюкозурией. Глюкозурия обычно сопровождается полиурией при повышении осмолярности мочи, поскольку глюкоза – осмотически активное вещество. Между степенью глюкозурии и полиурии обычно наблюдается параллелизм.

Глюкоза является пороговым веществом, то есть для нее имеется «почечный порог выведения» – та концентрация вещества в крови и «первичной» моче, при которой оно уже не может быть полностью реабсорбировано в канальцах и появляется в конечной моче. Почечный порог определяется ферментной системой почечного эпителия и, следовательно, в значительной степени индивидуален. По данным разных авторов почечный порог для глюкозы у взрослого человека с нормально функционирующими почками составляет 8,8 — 10 ммоль/л и снижается с возрастом (из-за снижения реабсорбции). У ребенка почечный порог выше (10,45 — 12,65 ммоль/л).

Как для любого порогового вещества, появление глюкозы в моче зависит от трех факторов: от концентрации глюкозы в крови, от процесса фильтрации ее в клубочках (гломерулярный клиренс) и от реабсорбции глюкозы в канальцах нефрона.

В норме объем клубочковой фильтрации составляет 130 мл/мин. Реабсорбция глюкозы почечным эпителием за 1 мин колеблется от 200 до 350 мг. Если при таком же клубочковом фильтрате концентрация глюкозы в крови превысит 10 ммоль/л, то в канальцы поступит глюкозы больше и часть ее не сможет реабсорбироваться и выделится с мочой.

Снижение объема клубочковой фильтрации (например до 50 мл/мин) не будет сопровождаться глюкозурией даже при 15 ммоль/л (300 мг/%) глюкозы в крови, так как в канальцы поступает количество глюкозы, не превышающее их резорбционной способности. Поэтому при некоторых хронических заболеваниях почек порог глюкозы повышается. В случае нефропатии, сопровождающейся нарушением резорбции глюкозы (ренальный диабет) возможна глюкозурия и при нормальном или пониженном уровне глюкозы в крови.

Состояния и заболевания, сопровождающиеся глюкозурией:

  1. Сахарный диабет – наиболее частая причина глюкозурии. При этом заболевании наблюдается абсолютная или относительная недостаточность инсулина — гормона, который определяет потребление глюкозы тканями (гликолиз) и образование гликогена из глюкозы в печени. Эти процессы поддерживают нормальный уровень глюкозы в крови. При дефиците инсулина гликолиз и синтез гликогена снижаются, что приводит к повышению глюкозы в крови и появлению ее в моче. Количество глюкозы в моче может колебаться в больших пределах от следов до 1,2%. Следует отметить, что глюкозурия у больных с инсулярной недостаточностью при нормально функционирующих почках наблюдается при гораздо меньших концентрациях глюкозы в крови, чем пороговая. Дело заключается в том, что почечный порог для глюкозы при диабете снижается. Процесс реабсорбции глюкозы в почечных канальцах не является простой диффузией: глюкоза переносится через почечные мембраны активно и первым этапом этого переноса является ее фосфорилирование, то есть превращение в глюкозо-6-фосфат. Данная реакция контролируется гексокиназой, активируемой инсулином. Поэтому при диабете снижается интенсивность реабсорбции глюкозы в почках и она появляется в моче при концентрации в крови, значительно меньшей, нежели соответствующей почечному порогу. Правда, при оценке этого явления следует помнить, что существуют здоровые люди с врожденным снижением почечного порога для глюкозы, у которых глюкозурия может возникнуть при приеме больших количеств углеводной пищи. Не следует также забывать, что встречаются больные сахарным диабетом с высоким уровнем глюкозы в крови, не сопровождающимся глюкозурией. Это объясняется тем, что на заключительной стадии сахарного диабета, когда к основному процессу присоединяются поражения почек, характеризующиеся в числе других проявлений и снижением уровня клубочковой фильтрации, уровень глюкозурии может снизиться вплоть до полного отсутствия глюкозы в моче.
  2. Глюкозурия, наблюдающаяся при остром панкреатите, носит преходящий характер и исчезает при стихании воспалительного процесса.
  3. Глюкоза появляется в моче при продолжительном голодании и прекращается через несколько дней после возобновления приема пищи.
  4. У людей в преклонном и старческом возрасте возможно снижение функции поджелудочной железы, сопровождающееся глюкозурией.
  5. Алиментарная глюкозурия, появляющаяся через 30 — 60 мин после приема пищи, богатой углеводами, исчезает через 3 — 5 часов. Наблюдается чаще у детей грудного возраста и при беременности.
  6. Глюкозурия может наблюдаться после повышенной физической нагрузки.
  7. Глюкозурия нервного происхождения возникает вследствие усиленного гликогенолиза в печени и гипергликемии. Она наблюдается при черепно-мозговых травмах, опухолях мозга, менингитах, токсикозах, энцефалитах, судорогах, внутричерепных кровоизлияниях, наркозе.
  8. Эмоциональная глюкозурия — при плаче, страхе, истерике и т. д.
  9. Токсическая глюкозурия возможна при отравлениях морфином, стрихнином, хлороформом, фосфором и др.
  10. Глюкозурия после приема некоторых лекарств (диуретин, кофеин, фенамин, кортикостероиды).
  11. Глюкоза может появляться в моче при лихорадочных состояниях (лихорадочная глюкозурия).
  12. Глюкозурия при сильном психическом возбуждении.
  13. Эндокринная глюкозурия возникает в результате нарушения секреции адреналина, тироксина, глюкокортикоидных гормонов, при акромегалии, синдроме Иценко-Кушинга, феохромоцитоме, гипернефроме, передозировке АКТГ, препаратов кортизола или их продолжительном приеме.
  14. Почечная (ренальная) глюкозурия развивается в результате нарушения реабсорбции глюкозы в канальцах. Различают первичную и вторичную ренальную глюкозурию. Первичная глюкозурия, так называемый ренальный диабет — это аномалия механизма реабсорбции глюкозы в проксимальных канальцах почек. Почечный порог глюкозы снижается до 6,32 — 0,82 ммоль/л (125 — 25 мг/%) без нарушения промежуточного обмена углеводов. Наблюдается главным образом у детей. Для ренального диабета свойственна постоянная глюкозурия, нормальный или несколько сниженный уровень глюкозы крови, отсутствие патологических отклонений при сахарной нагрузке и других симптомов диабета. Вторичная ренальная глюкозурия может встречаться при различных органических поражениях почек (хронический нефрит, нефроз, острая почечная недостаточность, гликогеновая болезнь и др.).

Оценка глюкозурии должна производиться с учетом принятых с пищей углеводов и количества суточной мочи.

Литература:

  • А. Я. Любина, Л. П. Ильичева и соавт. “Клинические лабораторные исследования”, М., “Медицина”, 1984 г.
  • Фролов В. А., Дроздова Г. А., Казанская Т. А., Билибин Д. П., Демуров Е. А. Патологическая физиология. – М.: ОАО «Издательство «Экономика», 1999. – 616 с.
  • Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике под редакцией Базарновой М. А., Морозовой В. Т. – Киев, “Вища школа”, 1988 г.
  • Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под редакцией Кост Е. А. – Москва, “Медицина”, 1975 г.
  • Морозова В. Т., Миронова И. И., Марцишевская Р. Л. – Исследование мочи — Москва, РМАПО, 1996 г.

Похожие статьи

Мочевина в крови. Клинико-диагностическое значение определения мочевины в крови

Определение концентрации мочевины в крови широко используется в диагностике, применяется для оценки тяжести патологического процесса, для наблюдения за течением заболевания и оценки эффективности проводимого лечения.

Раздел: Клиническая биохимия

Кетоновые тела в моче. Клинико-диагностическое значение.

В нормальной моче содержится минимальное количество кетоновых тел (за сутки выделяется 20 — 54 мг), которое не обнаруживается обычными качественными пробами. При выделении с мочой большого количества кетоновых тел качественные реакции становятся положительными – это явление патологическое и называется кетонурией.

Читайте также:  Анализ мочи на туберкулез

Раздел: Анализ мочи

Мочевина в моче. Клинико-диагностическое значение определения мочевины в моче

Определение концентрации мочевины в моче проводится значительно реже, чем определение уровня мочевины в крови и используется обычно при при обнаружении повышенного уровня мочевины в крови и решении вопроса о состоянии выделительной функции почек. При этом определяют суточную экскрецию мочевины с мочой. Повышенное содержание мочевины крови при снижении суточной экскреции с мочой чаще свидетельствует о нарушении азотовыделительной функции почек.

Раздел: Клиническая биохимия

Клиническое исследование химического состава и свойств мочи

В настоящее время в моче обнаружено более 150 различных химических веществ. Одни из них (например, мочевина) присутствуют в нормальной моче в достаточном количестве и определяются обычными биохимическими методами. При патологии может наблюдаться как увеличение, так и снижение уровня этих веществ в моче.

Раздел: Анализ мочи

Запах мочи

Запах особого диагностического значения не имеет. Свежевыпущенная нормальная моча без запаха.

Раздел: Анализ мочи

Методы определения глюкозурии

ГЛЮКОЗУРИЯ – выявление глюкозы в моче. В моче здорового человека глюкоза содержится в очень низкой концентрации (0,06-0,083 ммоль/л). Поэтому также из-за низкой чувствительности методов, она не выявляется при исследовании мочи в клинико-диагностических лабораториях. Обнаружение глюкозы в моче свидетельствует о патологии. Глюкозурия зависит от трех факторов: концентрации глюкозы в крови, количества фильтрата клубочков почки за одну мин, количества реабсорбированной в канальцах глюкозы в 1 мл.

Глюкозурии чаще предшествует гипергликемия. Профильтровавшаяся почечных клубочках глюкоза реабсорбируется в проксимальном отделе почечных канальцев.

Механизм всасывания глюкозы сложный (рис 12). Он обеспечивается рядом энергозависимых химических реакций и протонным насосом. В клетках глюкоза фосфорилируется в гексокиназной реакции, превращаясь в глюкозо-6-фосфат (Гл-6-Ф). Ферменты, участвующие в превращениях глюкозы в процессе всасывания, представляющие собой полиферментные системы, производящие активный транспорт ионов через клеточную мембрану и определяющие предел ее реабсорбции (порог).

Так на поверхности почечного эпителия проксимального канальца имеется фермент глюкокиназа и АТФ, с помощью которых глюкоза превращается в Гл-6-фосфат. Последний легко диффундирует в клетку, где под воздействием Гл-6-фосфатазы распадается: свободная глюкоза освобождается и поступает в кровь.

Величина канальцевой реабсорбции относительно постоянна. С возрастом наблюдается тенденция к ее снижению. Уровень глюкозы крови составляет 3,3 – 5,3 ммоль/л.

При нормально функционирующих почках глюкозурия появляется только в том случае, когда уровень глюкозы в крови превышает 8,8-9,9 ммоль/л (160-180 мг/%), так называемый “почечный порог” или гломерулярный клиренс глюкозы. Понятие это относительное, так как “почечный порог” определяется ферментной системой почечного эпителия и, следовательно, в значительной степени индивидуален. У ребенка “почечный порог” выше (10,45-12,65 ммоль/л или 190-230 мг/% ).

В норме объем клубочковой фильтрации составляет 130 мл/мин. Реабсорбция глюкозы почечным эпителием за 1 мин колеблется от 200 до 350 мг. Если при таком же клубочковом фильтрате концентрация глюкозы в крови превысит 10 ммоль/л, то в канальцы поступит глюкозы больше и часть ее не сможет реабсорбироваться и выделиться с мочой.

Например, снижение объема клубочковой фильтрации до 50 мл/мин не будет сопровождаться глюкозурией даже при 16,5 ммоль/л (300 мг/%) глюкозы в крови, так как в канальцы поступает количество глюкозы, не превышающее их резорбционной способности. Поэтому при некоторых хронических заболеваниях почек порог глюкозы повышается. В случае нефропатии, сопровождающейся нарушением резорбции глюкозы (ренальный диабет) возможна глюкозурия и при нормальном или пониженном уровне глюкозы в крови.

Причины глюкозурии:

  • дефицит инсулина,
  • снижение функции почек и/или печени,
  • нарушение гормональной регуляции углеводного обмена,
  • употребление в пищу большого количества углеводов.

Патогенез глюкозурии. Глюкозурии бывают панкреатические (инсулярные), вследствие недостаточности инсулярного аппарата и внепанкреатические (экстраинсулярные), возникающие в результате нарушения одного из звеньев регуляции углеводного обмена.

Инсулин определяет потребление глюкозы тканями (гликолиз) и образование гликогена из глюкозы в печени. Эти процессы поддерживают нормальный уровень глюкозы в крови. При дефиците инсулина гликолиз и синтез гликогена снижается, что приводит к повышению глюкозы в крови и появлению ее в моче.

Наиболее частая форма глюкозурии – диабетическая. Количество глюкозы в моче может колебаться в больших пределах от следов до 12%. Однако встречаются больные диабетом с высоким уровнем глюкозы в крови, сопровождающейся глюкозурией. Их почечный порог может составлять 500-540 ммоль/л. Для диабетической глюкозурии характерно повышение уровня глюкозы в крови и глюкозурия натощак. Глюкозурия, обычно, сопровождается полиурией при повышении осмолярности мочи, поскольку глюкоза осмотически активное вещество. Между степенью глюкозурии и полиурии, как правило, наблюдается параллелизм. Оценка глюкозурии должна производиться с учетом принятых с пищей углеводов и количества суммарной мочи.

Глюкозурия, наблюдающаяся при остром панкреатите, носит преходящий характер и исчезает при стихании воспалительного процесса. Глюкозурия появляется при продолжительном голодании и прекращается через несколько дней после возобновления приема пищи. У людей в преклонном и старческом возрасте возможно снижение функции поджелудочной железы сопровождающееся глюкозурией.

Алиментарная глюкозурия, появляющаяся через 30-60 мин после приема пищи богатой углеводами, исчезает, через 2-5 часов. Наблюдается чаще у детей грудного возраста и при беременности.

Глюкозурии нервного происхождения возникают вследствие усиленного гликогенолиза в печени и гипергликемии. Они имеют место при черепно-мозговых травмах, опухолях мозга, менингитах, токсикозах, энцефалитах, судорогах, внутричерепных кровоизлияниях, наркозе. Эмоциональные – при плаче, страхе, истерике и т.д.

Глюкозурии возможны при отравлениях (токсические), лихорадочных состояниях (лихорадочные), сильном психическом возбуждении.

Эндокринные глюкозурии возникают в результате нарушения секреции адреналина, тироксина, глюкокортикоидных гормонов, при акромегалии, синдроме Иценко-Кушинга, феохромоцитоме, гипернефроме, передозировке АКТГ, препаратов кортизона или их продолжительном приеме.

Почечные (ренальные) глюкозурии развиваются в результате нарушения резорбции глюкозы в канальцах.

Различают первичную и вторичную ренальную глюкозурию.

Первичная глюкозурия, так называемый ренальный диабет – это аномалия механизма резорбции глюкозы в проксимальных канальцах почек. Почечный порог глюкозы снижается до 6,32-0,82 ммоль/л (125-25 мг%) без нарушения промежуточного обмена углеводов. Наблюдается главным образом у детей. Для ренального диабета свойственна постоянная глюкозурия, нормальный или несколько сниженный уровень глюкозы крови, отсутствие патологических отклонений при сахарной нагрузке и других симптомах диабета.

Вторичные ренальные глюкозурии могут встречаться при различных органических поражениях почек (хронический нефрит, нефроз, острая почечная недостаточность, гликогеновая болезнь и др.).

Варианты гипергликемий и глюкозурии:

  • нарушение резорбции глюкозы в канальцах характеризуется глюкозурией при нормальном содержании глюкозы в крови;
  • гипергликемия, не сопровождающаяся глюкозурией, наблюдается в тех случаях, когда концентрация глюкозы в моче не превышает порог реабсорбции глюкозы в канальцах; при превышении почечного порога гипергликемия сопровождается глюкозурией;
  • увеличение глюкозы крови и отсутствие ее в моче свидетельствует о нарушении почечной фильтрации;
  • в пожилом возрасте, вследствие снижения активности ферментов почечного эпителия, может наблюдаться незначительная глюкозурия, которая легко компенсируется диетой.

Оценивая степень глюкозурии, необходимо всегда расчитывать выделенное количество глюкозы за сутки (24 ч).

Определение “почечного порога” глюкозы

  1. После опорожнения мочевого пузыря, берут кровь для анализа глюкозы.
  2. Дают пациенту выпить стакан воды (с целью увеличения диуреза).
  3. Через час собирают мочу.
  4. Определяют в ней концентрацию глюкозы.

Результаты исследования: обнаружение глюкозы в моче при данной концентрации дает основание считать, что эта концентрация не является “почечным порогом” данного пациента.

Методы определения углеводов

Обнаружение глюкозы в моче проводят с помощью реактивной бумаги Глюкотест, Глюкофан, готового набора для экспресс-анализа и других cогласно прилагаемым инструкциям. Чувствительность – 2 ммоль/л. Концентрация глюкозы 1,7 ммоль/л в утренней порции мочи оценивается, как физиологическая глюкозурия.

основан на способности глюкозы восстанавливать в щелочной среде при нагревании гидрат окиси меди синего цвета в желтки гидрат закиси меди. Во избежание образования из гидрата окиси меди при нагревании черного осадка окиси меди к реактиву добавляют глицерин, гидроксильные группы которого связывают гидрат окиси меди.

Реактив Гайнеса

  1. 13,3 г кристаллической сернокислой меди (CuSO4 x 5H20) хч растворяют в 400 мл дистиллированной воды.
  2. 50 г едкого натра растворяют в 400 мл дистиллированной воды.
  3. 15 г глицерина ч или чда растворяют в 200 мл дистиллированной воды. Смешивают 1 и 2 растворы и тотчас приливают 3 раствор. Реактив стойкий.

Каплю мочи и 9 капель реактива Гайнеса доводят до кипения. В присутствии глюкозы появляется желтая или оранжевая окраска, если цвет смеси не меняется, глюкозы в моче нет.

Примечание. Моча больных диабетом исследуется свежей. Для хранения мочи добавляют консерванты: хлороформ, тимол или толуол по 0,1 мл на 100-200 мл мочи.

основано на свойстве глюкозы вращать плоскость поляризационного луча вправо. По углу вращения определяют количество глюкозы в моче.

Реактивы:

  1. 30% раствор уксуснокислого свинца
  2. 30% р-р СН3СООН2

Условия опыта: моча должна быть прозрачной, кислой реакции, освобожденной от белка. Для этого мочу подкисляют СН3СООН, кипятят, охлаждают и фильтруют. При наличии пигментов или помутнения к 10 мл мочи прибавляют 1 мл уксуснокислого свинца, подкисленного СН3СООН2, перемешивают и фильтруют. Фильтрат должен быть прозрачным. Определение проводят по инструкции к поляриметру. Ложноположительный результат возможен при приеме тетрациклина, хлортетрациклина, которые являются оптически активными веществами, выделяются с мочой.

Определение количества глюкозы в моче проводится также ферментативным глюкозооксидазным методом, единым для определения глюкозы крови и мочи.

Молочный сахар (лактоза) дает те же реакции восстановления, что и глюкоза. Специфичной на лактозу является реакция Мальфатги:

Реактивы:

  1. 10 % раствор едкого натра.
  2. Аммиак (не слабее 10 %)

К 8-10 мл мочи приливают 4-5 мл аммиака и 5-10 капель едкого натра, нагревают на водяной бане при 160-70°C. В присутствии лактозы появляется розовое окрашивание, глюкоза дает желтое окрашивание.

Количество лактозы определяют в поляриметре. Полученный результат умножают на 0,947.

Фруктоза (левулеза) мочи дает все реакции на глюкозу и вращает плоскость поляризационного луча влево.

Реактивы:

  1. Резорцин.
  2. НС1 концентрированная.

Растворяют несколько кристаллов резорцина в 3 мл НС1, прибавляют двойное количество мочи и быстро нагревают на водяной бане до кипения. Пробу не следует долго кипятить, т.к. при этом из глюкозы образуется левулеза. При наличии в моче фруктозы содержимое пробирки окрашивается в вишнево-красный цвет. Проба считается положительной при быстром появлении окраски.

Количество фруктозы определяют на поляриметре, умножают полученный результат на 0,54 (при сочетании в моче фруктозы и глюкозы обнаружить ее количество на поляриметре не удается).

Реактивы:

  1. НС1 концентрированная.
  2. Флороглюцин.

К 3 мл мочи прибавляют равный объем НС1 и на кончике ножа флороглюцин. Нагревают на водяной бане до кипения. При наличии галактозы (пептоз и глюкуроновых кислот) образуется красное окрашивание.

Виды сахаров и их клиническое значение приведены в таблице 11

Виды сахаровПатогенез
СахароурияПерегрузка сахаром или вареньем у грудных и маленьких детей
СахарозоурияПрием тростникового сахара, непереносимость тростникового сахара, энтериты, поражение энтероцитов (целиакия), пилороспазм, рвота
ЛактозоурияНедостаток лактазы у недоношенных и новорожденных.
Непереносимость к молочному сахару, врожденная недостаточность резорбции лактозы (алактозия), прием лактозы, тяжелые диспепсии, токсикозы, экссудативный диатез, целиакия (несостоятельность энтероцитов)
ПентозурияОтсутствие фермента фруктозо-фосфатальдолазы, недостаток ферментов у недоношенных и новорожденных
ФруктозурияВрожденная повышенная чувствительность к фруктозе, нарушение обмена углеводов при диабете, болезни Вильсона, болезнях печени. Врожденный не достаток фермента кетогексокиназы
ГалактозурияНепереносимость к молочному сахару, отсутствие фермента гексозо-1-фосфатуридил-трансферазы, при болезнях печени, нарушениях пищеварения, гипертиреозе.
МальтозурияКормление солодовыми экстрактами, панкреатит в раннем детстве
ЛевулезурияПрием меда, врожденный недостаток кетогексокиназы
АрабинозурияПрием фруктов, диабет
КсилозурияПрием фруктов, диабет, отсутствие L-ксилулозоредуктазы
РибозурияПрогрессирующая мышечная дистрофия
  1. Алексеев Г.А., Берлинер Г.Б. Гемоглобинурии. М. Медицина, 1972 г.
  2. Болезни почек, под ред. Мождракова Г. и Попова Н. Компендиум. Краткое руководство по анализу мочи. Изд. Roche-Diagnostics, 1998 г.
  3. Рачев Л., Тодоров И., Cmameea Cm. Обмен веществ в детском возрасте. Медицина и физкультура, София, 1967 г. Руководство по клинической лаборатореной диагностике, под ред. В.В.Меньшикова, М.Медицина, 1982 г.
  4. Руководство по клинической лабораторной диагностике, под ред. М.А.Базарновой, В.Т.Морозовой. Киев, Вища школа. 1990 г.
  5. Руководство по цитологической диагностике опухолей человека, под ред. А.С.Петровой, М.П.Птохова. М. Медицина, 1976 г.
  6. Рябов С.И., Наточин Ю.В., Бондаренко Б.Б. Диагностика болезней почек. Л. Медицина. 1979 г.
  7. Справочник по нефрологии, под ред. И.Е.Тареевой, Н.А.Мухина
  8. Тодоров И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. Медицина и физкультура. София. 1966 г.
  9. Топарская В.Н. Физиология и патология углеводного, липидного и белкового обмена. М. Медицина. 1970 г.
  10. Цитологическая классификация опухолей (Международная гистологическая классификация опухолей N 17), ВОЗ, Женева, 1982
  11. Цитологическая диагностика опухолей и предопухолевых процессов, под ред. А.С.Петровой. М. Медицина, 1985 г.
  12. Эмануэль В.Л. Клиническая лабораторная диагностика. 1997, 10, стр. 25-32.
Читайте также:  Щелочная среда (рН) урины

Источник: В.Т.Морозова, И.И.Миронова, Р.Л.Марцишевская. Мочевые синдромы. Лабораторная диагностика. Учебное пособие. Российская медицинская академия последипломного образования. М., 2003

Количественное определение глюкозы в моче

1. Поляриметрический метод. Основан на свойстве глюкозы, вращать плоскость поляризованного луча поляриметра вправо, причем угол отклонения луча пропорционален содержанию глюкозы в моче. Требования к материалу: полная прозрачность, кислая реакция, отсутствие белка (мочу подкисляют слабой уксусной кислотой, перемешивают, кипятят и фильтруют).

2. Колориметрический метод Альтгаузена. Основан на появлении цветной реакции при нагревании глюкозы со щелочью: 4 мл мочи смешивают с 1 мл 10% раствора едкого натра и кипятят в пробирке 1 минуту. Через 10 минут после кипячения цвет жидкости сравнивают с цветной шкалой Альтгаузена (каждый цветовой оттенок соответствует содержанию глюкозы).

3. Экспресс-метод тест полосками – Глюкотест, Глюкофан и др. – сравнивают со стандартной шкалой, выражающей содержание сахара в % и ммоль/л.

Глюкозурия

Глюкозурия – появление сахара. Возникает при повышении концентрации глюкозы в крови выше 9,9 ммоль/л (почечный порог реабсорбции глюкозы).

Физиологическая глюкозурия — при употреблении с пищей большого количества углеводов (алиментарная), после приема кофеина, кортикостероидов, волнения, стресса.

Патологическая глюкозурия — при сахарном диабете, тиреотоксикозе, патологии гипофиза (синдром Иценко—Кушинга), циррозе печени.

Почечная (ренальная) глюкозурия — следствие нарушения реабсорбции глюкозы в канальцах почек (уровень глюкозы в крови может быть даже снижен!). Первичная – при врожденной недостаточности почечного фильтра, вторичная – при ХГН, нефротическом синдроме, ОПН.

Определение кетоновых (ацетоновых) тел в моче.

Кетоновые тела – ацетон, ацетоуксусная и бетаоксимасляная кислоты.

Обнаружение кетоновых тел в моче – кетонурия.

Качественные реакции на кетоновые тела:

1. Проба Ланге. 10 мл профильтрованной мочи + 0,5 мл свежеприготовленного 10% раствора нитропруссида натрия + 0,5-1 мл концентрированной уксусной кислоты, осторожно наслаивают несколько мл 25% раствора аммиака. Положительная реакция – фиолетовое кольцо.

2. Экспресс-анализ – таблетки «Реагент», тест-полоски (принцип тот же).

Кетонурия появляется при сахарном диабете, нарушении обмена веществ, токсикозах, голодании, рвоте, поносах.

Определение желчных пигментов в моче

Билирубин и уробилиноиды.

Билирубин в норме нет. Качественные пробы основаны на превращении билирубина под воздействием окислителей (йода, азотной кислоты) в биливердин зеленого цвета.

1. Проба Розина: 2-3 мл мочи + наслаивают 1% спиртовой раствор йода. Зеленое кольцо – при наличии билирубина.

2. Проба Фуше: 10 мл мочи + 5 мл 15% раствора хлорида бария, фильтруют. На фильтр + 1-2 кп реактива Фуше (100 мл 25% раствора трихлоруксусной кислоты и 10 мл 10% раствора полуторахлористого железа). На фильтре – сине-зеленые пятна (при наличиии билирубина).

Билирубинурия — при печеночной и подпеченочной желтухах, когда в крови повышается содержание билирубин-глюкуронида

Уробилиноиды в моче

Уробилиноиды: уробилиногены (уробилины) и стеркобилиногены (стеркобилины).

Качественные пробы на уробилиноиды:

1. Проба Богомолова: 10—15 мл мочи + 2—3 мл насыщенный раствор сульфата меди, ч/з 5 мин+ 2-3 мл хлороформа, взболать. Розово-красное окрашивание (при наличии).

2. Проба Флоранса: 6-10 мл мочи, подкисленной 8-10 кп HCl, + 2-3 мл диэтилового эфира. Эфирный слой отобрать, наслоить на 2-3 мл конц. HCl. Красное кольцо (при наличии уробилина).

Проба положительна у здоровых! Используется для установления факта полного отсутствия в моче уробилиновых тел.

Уробилинурия — при паренхиматозных поражениях печени гемолитических анемиях, некоторых заболеваниях кишечника (энтериты, запоры, кишечная непроходимость)

Глюкозурия. Определение глюкозы в моче

Глюкозурия. Определение глюкозы в моче.

Глюкозурия

Глюкозурия (glucosuria) — появление глюкозы в моче:

  • физиологическая (при введении с пищей большого количества углеводов, после эмоционального напряжения);
  • внепочечная (сахарный диабет, цирроз печени, панкреатит, рак поджелудочной железы, тиреотоксикоз, синдром Иценко — Кушинга, феохромоцитома, черепно-мозговые травмы, инсульты, отравление оксидом углерода, морфином, хлороформом);
  • ренальная (хронические нефриты, нефрозы, амилоидоз, острая почечная недостаточность, беременность, от равление фосфором, некоторыми лекарственными препаратами).

Для правильной оценки глюкозурии необходимо исследовать мочу, собранную за сутки, и вычислить суточную потерю сахара с мочой.

При нормально функционирующих почках глюкозурия проявляется только в тех случаях, когда увеличивается концентрация сахара в крови, т.е. при гипергликемии. Так называемый почечный по рог глюкозы — концентрация глюкозы в крови, выше которой отмечается глюкозурия (7,8–8 ммоль/л). Концентрация глюкозы в крови обычно не превышает 4,6–6,6 ммоль/л (0,8–1,2 г/л).

Реже наблюдается почечная (ренальная) глюкозурия, связанная с нарушением реабсорбции глюкозы в канальцах, когда глюкозурия появляется при нормальной концентрации сахара в крови.

Определение глюкозы в моче

Качественные пробы

Большинство качественных проб, применяемых для определения глюкозы в моче, основано на редукционных свойствах альдегидной группы глюкозы. В качестве окислителя используют какую-либо легко редуцирующуюся соль, дающую при восстановлении окрашенное соединение. К таковым методам относят пробу Фелинга, Гайнеса, Ниландера, Бенедикта, глюкозооксидазную пробу.

Глюкозооксидазная (нотатиновая) проба

В основе метода лежит окисление глюкозы ферментом глюкозооксидазой (нотатином). Образующаяся при этом перекись водорода расщепляется другим ферментом (пероксидазой) и окисляет красительиндикатор (производное бензидина), изменяя его окраску. Для определения глюкозы в моче индикаторную бумажку «Глюкотест» погружают в испытуемую мочу на 1–2 сек так, чтобы нанесенная на бумажку желтая полоса полностью смочилась. Через 2 мин ориентировочно определяют концентрацию глюкозы в моче путем сравнения интенсивности окраски цветной полосы с цветной шкалой, имеющейся в стандартном наборе. Необходимо помнить, что при очень высокой глюкозурии (более 2 %) интенсивность окраски цветной полосы не меняется. Индикаторную бумагу следует хранить в плотно закрытом пенале, в темном прохладном месте (но не в холодильнике!).

Проба Гайнеса

Реакция основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в щелочной среде (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета), а затем в закись меди (красного цвета). Чтобы из гидрата окиси меди при нагревании не образовался черный осадок меди, к реактиву добавляют глицерин, гидроксильные группы которого связывают гидрат окиси меди.

Реактив Гайнеса готовят следующим образом:

1) 13,3 г х. ч. кристаллического сульфата меди (CuSO4 · 5H2O) растворяют в 400 мл воды;
2) 50 г едкого натра растворяют в 400 мл воды;
3) 15 г ч. или ч. д. а. глицерина разводят в 200 мл воды. Смешивают 2-й и 1-й растворы и тотчас приливают 3-й. Реактив стойкий.

Пробу проводят в следующем порядке: к 3–4 мл реактива прибавляют 8–12 капель мочи до появления голубоватой окраски. Смешивают и нагревают верхнюю часть пробирки до начала кипения над пламенем газовой горелки или спиртовки. Нижняя часть пробирки является контролем. При наличии глюкозы в моче наблюдается ясный переход цвета из бледно-голубого в желтый.

Проба Гайнеса является надежной, так как при большом разведении мочи (8–12 капель мочи и 3–4 мл реактива) восстанавливающее действие других редуцирующих веществ мочи (мочевая кислота, индикан, креатин, желчные пигменты), а также некоторых лекарственных веществ (ацетилсалициловая кислота, кофеин, ПАСК) выражено слабо. Наличие большого количества белка в моче мешает правильной оценке редукционных проб, поэтому желательно предварительно его удалить, подкислив мочу несколькими каплями уксусной кислоты, нагрев до кипения и отфильтровав.

Количественные методы

Колориметрический метод определения глюкозы в моче по Альтгаузену

Принцип метода: при нагревании глюкозы со щелочью появляется цветная реакция. Техника определения: К 4 мл мочи приливают 1 мл 10% натра едкого и кипятят 1 мин. Через 10 мин после кипячения цвет жидкости сравнивают с цветной шкалой, на которой возле каждой окрашенной полосы указан процент содержания глюкозы. Лучше пользоваться шкалой, приготовленной с помощью реактивов. Для этого берут 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 и 4,0% растворы глюкозы, обрабатывают их так же, как и исследуемую пробу мочи и плотно закрывают пробками. Цвет этих растворов не меняется примерно 10 дней.

Метод Альтгаузена дает ориентировочные результаты и поэтому им можно пользоваться при отсутствии поляриметра. Исключительной простотой выполнения отличается модифицированный метод Альтгаузена, который не требует дефицитных реактивов и занимает мало времени.

Принцип модифицированного метода Альтгаузена: при нагревании мочи, содержащей глюкозу, с раствором едкой щелочи изменяется цвет содержимого пробирки.

Таблица 9. Приготовление разведений для построения калибровочного графика определения глюкозы в моче по модифицированному методу Альтгаузена

4 мл исследуемой мочи смешивают с 1 мл 10% раствора едкого натра и ставят в кипящую водяную баню на 3 мин. Через 10 мин пробу колориметрируют на ФЭКе с зеленым светофильтром в кювете с рабочей шириной 5 мм. В качестве контроля берут воду. Количество сахара в моче находят по калибровочной кривой, для построения которой готовят 8% стандартный раствор глюкозы, из которого затем необходимо приготовить на прозрачной моче с низкой относительной плотностью 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0% растворы глюкозы по схеме, представленной в табл. 9: из каждого разведения берут по 4 мл раствора, добавляют по 1 мл 10% раствора едкого натра и обрабатывают как опытные пробы. Определяют оптическую плотность в каждом соответствующем разведении и строят график. Для удобства работы по графику составляют таблицу. Следует помнить, что мочу перед определением глюкозы необходимо перемешать и при высоких концентрациях глюкозы в пробе (4–5 %) ее необходимо развести.

Цветная реакция с ортотолуидином

Основана на том, что глюкоза при нагревании с реактивом ортотолуидин дает окрашенное соединение, степень окраски которого про- порциональна концентрации. Для проведения пробы приготовляют ортотолуидиновый реактив (в 94 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 0,15 г тиомочевины и добавляют 6 мл ортотолуидина) и стандартный раствор глюкозы. Мочу разводят в 2–10 раз в зависимости от характера качественной пробы. 0,1 мл разведенной мочи смешивают с 4,5 мл ортотолуидинового реактива, помещают на 8 мин в кипящую водяную баню, после чего сразу охлаждают до нормальной (комнатной) температуры. Полученный цветной раствор колориметрируют на ФЭКе при длине волны 590– 650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля, который ставят также, но вместо мочи берут стандартный раствор глюкозы. Наличие белка в моче не мешает определению глюкозы данным методом, поэтому он является предпочтительным.

Поляриметрический способ определения глюкозы в моче

Поляриметрический способ позволяет определить процент глюкозы в моче при помощи так называемого сахариметра. Принцип определения основан на том, что глюкоза, находящаяся в растворе, вращает плоскость поляризованного света пропорционально содержанию глюкозы в растворе. Перед определением необходимо отметить препараты тетрациклина, экскретируемые с мочой и искажающие результаты за счет дополнительной оптической активности. Для исследования мочу необходимо освободить от белка и профильтровать. Если моча после фильтрования остается мутной, то используют адсорбент. Трубку поляриметра заполняют просветленной мочой, накрывают шлифованным стеклышком, плотно завинчивают, насухо вытирают и помещают в аппарат. По интенсивности затемнения правой половины поля зрения поляриметра определяют угол отклонения поляризованного луча, что выражается в градусах шкалы прибора. Угол отклонения в 1° соответствует 1 % глюкозы (при длине трубки 18,94 см).

Этот метод на сегодняшний день используется редко, так как имеет ряд недостатков: субъективен (индивидуальное восприятие освещения), достаточно трудоемок и дает неточные результаты, если не достигнута полная прозрачность мочи.

Жив ли Христос? Воскрес ли Христос из мертвых? Исследователи изучают факты

Добавить комментарий